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《中國藥典》2020年版第一增補(bǔ)版 “9405 糖蛋白的糖基化分析指導(dǎo)原則“新增指導(dǎo)原則梳理及應(yīng)對(duì)方

發(fā)布時(shí)間:2024-01-04 閱讀次數(shù):1099次


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國家藥典委員會(huì)發(fā)布公告,《中國藥典》2020年版第一增補(bǔ)本已編制完成,將于2024年3月12日正式實(shí)施。本篇對(duì)生物制品新增指導(dǎo)原則中“9405 糖蛋白的糖基化分析指導(dǎo)原則”的相關(guān)內(nèi)容進(jìn)行梳理,并為廣大客戶提供島津的應(yīng)對(duì)方案。下圖為指導(dǎo)原則框架。


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糖蛋白的糖基化是通過糖基受體、糖基供體和糖基轉(zhuǎn)移酶三類分子的協(xié)同作用將單糖或寡糖以糖苷鍵形式連接在蛋白質(zhì)的氨基酸殘基上,是蛋白質(zhì)的一種翻譯后修飾。本指導(dǎo)原則闡述了糖蛋白糖基化分析的理念、方法及應(yīng)用和驗(yàn)證的相關(guān)要求。圖1為糖基化分析的決策框架圖。


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糖基化分析流程通常為一個(gè)多步驟的過程,必要時(shí)還需要進(jìn)行前處理(糖蛋白分離和純化)以去除干擾因素(如輔料、鹽等)。按照完整糖蛋白分析、糖肽分析、寡糖分析、單糖分析等4種不同的互補(bǔ)分析方法,完成糖基化分析的全部流程。糖蛋白N-糖基化和O-糖基化分析流程可參見圖2。


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下面具體考量幾種糖蛋白分析流程和方法。


1完整糖蛋白分析:提供關(guān)于糖蛋白糖基化分布等總體信息

1)  糖基化分布、分子量:毛細(xì)管電泳法、質(zhì)譜法

2)  糖基化導(dǎo)致的蛋白質(zhì)分子量遷移:聚丙烯酰胺凝膠電泳法、毛細(xì)管電泳法

3)  蛋白片段糖基化修飾:還原酶解后質(zhì)譜分析法

4)  唾液酸修飾程度:高效液相色譜法、離子色譜法、等電聚焦電泳法、毛細(xì)管電泳法


應(yīng)用案例1:完整糖蛋白分子量分析

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2糖肽分析:提供特定糖基化位點(diǎn)的糖基化類型、占有率、寡糖結(jié)構(gòu)信息

1)  糖肽富集或分離:反相/親水高效液相色譜法、毛細(xì)管電泳法

2)  糖基化位點(diǎn)及糖肽結(jié)構(gòu):質(zhì)譜法

3)  寡糖分子量、位點(diǎn)占有率:質(zhì)譜法


應(yīng)用案例2:糖肽結(jié)構(gòu)分析

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3寡糖分析:提供多種寡糖類型的結(jié)構(gòu)以及相對(duì)含量的信息

1)  非衍生寡糖的分離與分析:高效陰離子色譜法、多孔石墨化碳色譜法、質(zhì)譜法

2)  衍生寡糖的分離與分析:色譜法、毛細(xì)管電泳法、質(zhì)譜法(熒光標(biāo)記衍生、紫外標(biāo)記衍生、全甲基化衍生)


應(yīng)用案例3:2-AB標(biāo)記的N糖分析

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4單糖分析:提供單糖鑒別、含量及單糖組成信息

1)  非衍生單糖的分離與定量分析:比色法、高效陰離子色譜法、多孔石墨化碳色譜法、質(zhì)譜法

2)  衍生單糖的分離與定量分析:反相色譜法、離子交換色譜法、氣相色譜法、毛細(xì)管電泳法、熒光或紫外檢測(cè)法


應(yīng)用案例4:抗體中唾液酸測(cè)定

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中國藥典2015版和2020版提出了糖基化的重要性,有部分具體方法,但缺乏糖基化分析指導(dǎo)原則。本新增指導(dǎo)原則從完整糖蛋白分析、糖肽分析、寡糖分析、單糖分析4個(gè)方面詳細(xì)收載了前處理方法及檢測(cè)方法,指導(dǎo)如何選擇適當(dāng)?shù)姆椒ㄍ瓿闪己玫奶腔治?。島津不斷開發(fā)新方法,持續(xù)推出滿足藥典指導(dǎo)原則的應(yīng)用方案。


注:完整應(yīng)用報(bào)告請(qǐng)掃描下方二維碼獲取。

1臺(tái)式 MALDI-TOF MS 應(yīng)用于糖蛋白質(zhì)分子量測(cè)定

2 MALDImini應(yīng)用于糖肽分析

3利用Q-TOF結(jié)合熒光檢測(cè)器分析2-AB標(biāo)記N糖

4生物藥中寡糖評(píng)估方法的介紹

5超高效液相色譜法用于抗體中唾液酸的測(cè)定

6 LCMS用于抗體中唾液酸的測(cè)定


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